Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型心血管疾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现胰脏自身突变到浮现1型号白血病药理学病征的实质性率在老年人时期就有很好的描绘出，多个胰脏自身突变感染性的老年人之前有70%在血清转换后10年内患上白血病，而随访15年的老年人这一百分比减极多到84%。远比，占多数药理学1型号白血病一半以上的型号1型号白血病的发病的系统还不能赢取更好的科学研究。

越发多的人开始适用分期系统来概念1型号白血病的实质性：个基底在浮现多种胰脏自身突变时重回第1下一阶段，浮现血糖异常时重回第2下一阶段，浮现病征时重回第3下一阶段。一些多发胰脏自身突变感染性的个基底，在1期和2期，实质性更更慢，并发展为发病的1型号白血病。我们之前描绘出了一分组在首次探测到多种胰脏自身突变样本后至极多10年无白血病的极更慢实质性者，这分组病征数量极多，但特性非常确切。随后，我们见到胰脏自身蛋白选择性CD8+T肝细胞重排该在实质性平稳的病征之前基本不存在，但在近期发病和长期以来存在的白血病病征之前很容易探测到。这或许断定，与实质性病征相对于，这些病征免疫性重排该的调节增强。

更早科学研究断定，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量正常，但白血病病征存在一些动态缺陷，其之前都有对IL-2的重排该能力降低。此外，白血病病征之前的不稳定性CD4+T肝细胞或许对调节更具抵抗性，展现出为不稳定性T肝细胞的诱发减弱，自然产生的Treg和基底外产生的诱导Treg，以及蛋白经历的CD4+T肝细胞之前IL-2重排该减弱。本科学研究的用意是描绘出了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在群集极平稳实质性者之前的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX科学研究是一项以成年人系统化的纵向科学研究，在21岁以下患病的病征亲属之前检测1型号白血病的危险因素。我们之前描绘出了长期以来平稳实质性者的特性，他们保持多重胰脏自身突变感染性大约10年，但不能浮现白血病的药理学病征，更慢性或非同步进行性免疫性。随后，10名在此期间保持无白血病并乐意提供大量血液样本的平稳实质性者纳入T和B肝细胞动态分析方法。在目前的科学研究之前，8名更慢实质性者(SP分组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的胰脏自身突变感染性。所有的参与者都处于1型号白血病实质性的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身突变对某些蛋白的感染性重排该，然而，一名病征已经处于2期至极多6年，但不能浮现药理学病征，一名病征被诊断为白血病，该受试者72岁，在捕获实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法之前对该供基底同步进行了另行评估。分立外周血单个反应器肝细胞(PBMCs)，使用多表达式流式肝细胞法术和T肝细胞诱发试验评估供基底之前Treg的Hz、表型号和动态。适用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、比如说和回归)同步进行无监督聚类分析方法，评估Treg表型号。

结果：与健康供基底相对于，来自更慢实质性基底的梦境CD4+T肝细胞的监督聚类断定，；也的梦境CD4+ TregHz减极多，与抑制作用诱导的TNFR关的蛋白(GITR)表示减极多有关。一名HbA1c升高的病征与实质性平稳者和反之亦然的比对分组相对于，Treg谱有所多种不同。动态分析方法断定，与健康供基底相对于，来自平稳实质性基底的Treg依赖性的CD4+不稳定性T肝细胞诱发明显损伤。展现出为对不稳定性CD4+T肝细胞CD25和CD134表示的诱发减极多。

所示1 深入的表型号分析方法断定，CD4+Treg变异号在更慢实质性队列之前减极多。由FlowSOM作用于的Treg一楼，有数在来自所有供基底的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上标物表示比对出10个元簇:梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)适用9个多种不同Treg上标作用于的10个元簇的MST。每个节点代表一个空降兵(100个空降兵)，很大的元空降兵(10个元空降兵)在节点分组周围上色。每个节点之前的糕所示问到单个上标的表示档次。(b)每个元聚类的热所示，以断定适度上标表示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说数量级为每个metacluster装有支线所示(数量级> 0.05%)确定为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T肝细胞(l)。深蓝色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩化验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 适用CITRUS的预测模型号证实，TregHz的减极多是实质性平稳的标志。分级暂时性(a - f)和柑橘分析方法(g-k)尤其SP参与者和反之亦然的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异性。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个基底的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示同步进行分立，模拟FlowSOM个基底。(b) HD(黑点)和SP(布氏)分组以及供基底SP 606(深蓝色)之前CD25+ cd127的Hz统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性有界的装有支线所示;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列间的多种不同。(j)装有支线所示断定了在SP(布氏)和HD(灰点)分组之前，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对来说数量级(百分比)。(k)直方所示断定每个簇的表型号(粉色)和Treg上标相对来说表示与氛围表示(深蓝色);上列，存储器Treg_3;上头偷偷地，存储器Treg_4。氛围与所有其他簇之前上标的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩化验

所示3 与健康献血者相对于，实质性平稳者梦境treg的GITR减极多。每个梦境CD4+T肝细胞元簇(梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表示上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表示热所示(sp606不都有在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇之前所有HD(蓝色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表示串联，断定直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon一对一符号秩和化验，p< 0.07(深蓝色)所有供基底都有，p< 0.05(深蓝色)供基底SP 606和反之亦然的HD不都有在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表示，从分级暂时性，从所有HD(蓝色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，断定直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩化验

所示4 来自平稳实质性的CD4+ treg肝细胞依靠不稳定性CD4+T肝细胞的能力降低。SP分组用深蓝色的支线和橘色问到，HD分组用蓝色的支线和橘色问到，深蓝色的支线/橘色问到供基底sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(应该答者)被上标为CFSE, Treg按辨别的百分比氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培训3紧接著同步进行流式肝细胞法术探测。(a-d)与CD4+应该答者相对来说应该的treg培训(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应该答者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发一般而言。适用感染性比对(；也的响应该肝细胞下同treg)量度诱发一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

所示5 不稳定性CD4+T肝细胞对平稳实质性的T肝细胞酪氨酸的诱发更敏感。SP分组用深蓝色的支线和橘色问到，HD分组用蓝色的支线和橘色问到，深蓝色的支线/橘色问到供基底sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(应该答者)被cfsel上标，treg按辨别的百分比氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培训3紧接著同步进行流式肝细胞法术(CD25反染)和肝依赖性分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606应该答者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发三份(b)。(c,d) CD25诱发三份(c)和CD134诱发三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训之前的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

论据：我们论据的论据是，来自平稳实质性姪的酪氨酸梦境CD4+Treg在GITR表示之前赢取了扩展和丰富，务实了必要性科学研究Treg在1型号白血病不确定性个基底之前的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28