Diabetologia：激活但基本功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到呼吸道自身免疫到注意到1标准型冠心病外科症状的方面不下在学龄前时期就有比较好的描绘单单，多个呼吸道自身免疫中都性的学龄前中都有70%在血清类比后10周内患上冠心病，而随访15年的学龄前这一分之一减低到84%。相较之下，占到外科1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的得病的系统会还没有人给予前提的集中都研究。

日渐多的人开始适用分期系统会来概念1标准型冠心病的方面：有机本体在注意到多种呼吸道自身免疫时转回第1过渡期，注意到高血压异常时转回第2过渡期，注意到症状时转回第3过渡期。一些多发呼吸道自身免疫中都性的有机本体，在1期和2期，方面很太快，并转型为得病的1标准型冠心病。我们之前描绘单单了一一组在首次侦测到多种呼吸道自身免疫结果结果显示后非常少10年无冠心病的极太快方面者，这一组病征人数少，但特质非常一致。随后，我们见到呼吸道自身抗原基因表达CD8+T蛋白质反应会在方面比较太快的病征中都基本不共存，但在近期得病和普遍共存的冠心病病征中都很非常容易侦测到。这有可能暗示，与方面病征相较，这些病征自身致病会的调控增强。

一时期集中都研究暗示，尽管调控性T蛋白质(Treg)为数正常，但冠心病病征共存一些功能性缺陷，其中都包括对IL-2的反应会技能减少。此外，冠心病病征中都的震荡CD4+T蛋白质有可能对调控更加具抵抗性，表现为震荡T蛋白质的减缓减弱，自然产生的Treg和本肾脏产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质中都IL-2反应会减弱。本集中都研究的借此是描绘单单了CD4+调控性T蛋白质(Treg)在一个大极比较太快方面者中都的特质，他们的年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法有：BOX集中都研究是一项以人群为基础的中轴集中都研究，在21岁以下确诊的病征亲属中都检查1标准型冠心病的危险因素。我们之前描绘单单了仍然比较太快方面者的特质，他们保持良好多重呼吸道自身免疫中都性少于10年，但没有人注意到冠心病的外科症状，太快性或非来进行性自身免疫。随后，10名独自保持良好无冠心病并不愿发放大量血液结果结果显示的比较太快方面者纳入T和B蛋白质功能性分析方法有。在目前的集中都研究中都，8名太快方面者(SP一组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的呼吸道自身免疫中都性。所有的与会者都所处1标准型冠心病方面的1期，尽管一些人随后夺去了呼吸道自身免疫对某些抗原的中都性反应会，然而，一名病征早就所处2期非常少6年，但没有人注意到外科症状，一名病征被确诊为冠心病，该受测者72岁，在采集实验结果结果显示时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在研究小组中都对该丝氨酸来进行了单独评估。分离外周血单个核子蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质法术和T蛋白质减缓试验评估丝氨酸中都Treg的振幅、表标准型和功能性。适用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、连续性和回归)来进行无监理聚类分析方法有，评估Treg表标准型。

结果：与身本体健康丝氨酸相较，来自太快方面本体的遗忘CD4+T蛋白质的监理聚类结果显示，激光阴的遗忘CD4+ Treg振幅减低，与持续性诱导的TNFR相关复合物(GITR)传达减低有关。一名HbA1c急剧下降的病征与方面比较太快者和匹配的解读一组相较，Treg谱有所并不相同。功能性分析方法有暗示，与身本体健康丝氨酸相较，来自比较太快方面本体的Treg介导的CD4+震荡T蛋白质减缓突出受损。表现为对震荡CD4+T蛋白质CD25和CD134传达的减缓减低。

三幅1 集中都的表标准型分析方法有结果显示，CD4+Treg亚标准型在太快方面链表中都减低。由FlowSOM降解的Treg会议室，围住在来自所有丝氨酸的光阴CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标示出物传达断定单单10个元簇:遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)适用9个并不相同Treg标示出降解的10个元簇的MST。每个节点代表者一个战略性(100个战略性)，更加大的元战略性(10个元战略性)在节点一组周围上色。每个节点中都的饼三幅回应单个标示出的传达级别。(b)每个元聚类的热三幅，以结果显示整本体标示出传达。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)降解三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的较厚。(e-l)一般来说金属量为每个metacluster盒线或三幅(金属量> 0.05%)确定为HD和SP一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白质(l)。黄色橘色代表者慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加下标秩化验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 适用CITRUS的预测模标准型证实，Treg振幅的减低是方面比较太快的标志。分级相关联(a - f)和葡萄分析方法有(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表者性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR传达来进行分离，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(网纹)和SP(布氏)一组以及丝氨酸SP 606(黄色)中都CD25+ cd127的振幅汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联孙集合的盒线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达高强度着色，箭头突单单的簇被识别为SP和HD链表彼此之间的并不相同。(j)盒线或三幅结果显示了在SP(布氏)和HD(灰点)一组中都，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的一般来说金属量(分之一)。(k)直方三幅结果显示每个簇的表标准型(蓝色)和Treg标示出一般来说传达与故事情节传达(黄色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。故事情节与所有其他簇中都标示出的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加下标秩化验

三幅3 与身本体健康献血者相较，方面比较太快者遗忘treg的GITR减低。每个遗忘CD4+T蛋白质元簇(遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的传达热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR传达串联，结果显示直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon相加下标秩和化验，p< 0.07(黄色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR传达，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串联，结果显示直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加下标秩化验

三幅4 来自比较太快方面的CD4+ treg蛋白质控制震荡CD4+T蛋白质的技能减少。SP一组用黄色的线或和橘色回应，HD一组用红色的线或和橘色回应，黄色的线或/橘色回应丝氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标示出为CFSE, Treg按掩蔽的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠转化蛋白质，培植3天后来进行流式蛋白质法术侦测。(a-d)与CD4+；也者一般来说应的treg培植(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培植。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE减缓倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓倍数。适用中都性解读(激光阴的号召蛋白质不含treg)计算减缓倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法有。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 震荡CD4+T蛋白质对比较太快方面的T蛋白质转化的减缓更加引人注意。SP一组用黄色的线或和橘色回应，HD一组用红色的线或和橘色回应，黄色的线或/橘色回应丝氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标示出，treg按掩蔽的分之一溶液。用抗CD3 /28微珠转化蛋白质，培植3天后来进行流式蛋白质法术(CD25反染)和蛋白质因孙子分析方法有。HD Treg与HD、SP或sp606；也者联合培植。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE减缓调升(b)。(c,d) CD25减缓调升(c)和CD134减缓调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中都的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法有。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得单单的结论是，来自比较太快方面孙子的转化遗忘CD4+Treg在GITR传达中都给予了扩展和丰富多彩，特别强调了进一步集中都研究Treg在1标准型冠心病后果有机本体中都的异质性的必要性。

标题单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28